Chào viva.dawnsun,
Trước tiên, bạn xác định xem máy UV-VIS của bạn có hoạt động tốt không đã, bạn có thể chuẩn bị dung dịch Chromate như trong pp aoac 991_10 và kiểm tra xem tại 410 nm thì Abs có thuộc khoảng 0.186–0.210 hay không? Nếu muốn chính xác hơn hãy pha dung dịch Kali Dichromate (K2Cr2O7) - đã được sấy khô 2h - ở nồng độ 60.02 mg/L rồi đo tại 4 bước sóng chuẩn và so sánh với các giá trị chuẩn như hình sau
Nếu máy không chính xác thì không có gì phải bàn thêm. Vì bất cứ máy UV-VIS nào khi được bấm Zero sẽ bộ phận vi điều khiển "hiểu" ngay tín hiệu điện áp Detector Photodiode sau đó là 0 volt để hiển thị ra giá trị Abs = 0. (hãy tạm hiểu nôm na như thế).
Vì bạn cứ nhắc đi, nhắc lại là "thấy blank âm thì làm lại" còn "blank dương thì làm tiếp" nên tôi mới nghi ngờ máy của bạn trục trặc hoặc quy trình có sự nhầm lẫn.
Nếu máy chính xác, hãy lưu ý lời khuyên của bác ngvtuan là "cho mẫu blank vào rồi mới set 0" vì blank = mẫu trắng, mẫu nền do đó nên đưa nền về giá trị = 0. Bạn nên nhớ sau khi set zero của bất kỳ dung dịch gì thì giá trị Abs lập tức = 0.000 Abs, vì thế sau khi cho blank vào bấm set zero và nhìn thấy giá trị hiển thị về 0 thì lấy blank ra, thêm mẫu (trên nền blank đó), trộn đều, đưa vào đo.
Thực ra, đo kinetic khi làm enzym mà bạn không có máy 2 chùm tia và có bộ ổn nhiệt như của bác ngvtuan, thì sai số của kết quả sẽ khá lớn do quá trình phản ứng không ổn định. Nhưng điều này sẽ thảo luận sau vì trước mắt bạn cần giải quyết rõ ràng cái vướng mắc ở khâu blank kia đã.