khắc phục sự cố nghẹt cột SPE khi load mẫu

[nguyenmaiF]

các bạn ơi, mình chạy máy HPLC, phân tích dư lượng tetracycline trong mẫu tôm sú nguyên liệu, trong quá trình trích li mẫu sử dụng cột SPE C18, sau khi hoạt hóa cột với MeOH và H2O, mình cho dung dịch mãu qua cột, sau khoảng 4-6 thể tích cột thì nó nghẹt cứng, dung dịch không thể nào qua cột được, mình không có cách nào khắc phục được, mong mọi người giúp đỡ.

[traidatcang_hp]

bạn ơi, bạn hoạt hóa cột sai rồi, bạn dùng N hexan mà hoạt hóa cột C18. lưu ý bạn hoạt hóa cột cho tơi mức bông trong cột nhé.sau đó bạn triết mẵu nhé. chúc bạn thành công nhé.

[traidatcang_hp]

trong phần chiết mẫu chúng ta hay dùng Na2SO4, dùng muối này để bảo vệ cột phân tích, muối bền.

[petiti]

Nguyên văn bởi nguyenmaiF

các bạn ơi, mình chạy máy HPLC, phân tích dư lượng tetracycline trong mẫu tôm sú nguyên liệu, trong quá trình trích li mẫu sử dụng cột SPE C18, sau khi hoạt hóa cột với MeOH và H2O, mình cho dung dịch mãu qua cột, sau khoảng 4-6 thể tích cột thì nó nghẹt cứng, dung dịch không thể nào qua cột được, mình không có cách nào khắc phục được, mong mọi người giúp đỡ.

Có phải em sử dụng đệm McIlvaine – EDTA cho quá trình chiết không? Thường khi làm TCs thì đối với những mẫu hơi nhiều béo một tí thì nên có thêm bước loại béo trước khi nạp qua cột C18. Thực ra trong bước ly tâm dịch chiết đệm, có thể sử dụng nhiệt độ thấp khi đó phần béo sẽ nổi phía trên. Không nên nạp toàn bộ dịch chiết qua cột, chỉ nên nạp một phần.
Nói chung cũng còn tùy thuộc vào độ nhạy thiết bị mà quyết định quá trình xử lý mẫu cho phù hợp nữa.
Vài điều như vậy, nếu có gì có thể trao đổi thêm.

[nguyenmaiF]

mình làm theo qui trình mà, qui trình cho hoạt hóa như sau: 20ml MeOH+20ml H2O. chẳng lẽ qui trình k đúng?

[nguyenmaiF]

Nguyên văn bởi petiti

Có phải em sử dụng đệm McIlvaine – EDTA cho quá trình chiết không? Thường khi làm TCs thì đối với những mẫu hơi nhiều béo một tí thì nên có thêm bước loại béo trước khi nạp qua cột C18. Thực ra trong bước ly tâm dịch chiết đệm, có thể sử dụng nhiệt độ thấp khi đó phần béo sẽ nổi phía trên. Không nên nạp toàn bộ dịch chiết qua cột, chỉ nên nạp một phần.
Nói chung cũng còn tùy thuộc vào độ nhạy thiết bị mà quyết định quá trình xử lý mẫu cho phù hợp nữa.
Vài điều như vậy, nếu có gì có thể trao đổi thêm.

đúng rồi đó anh, mà anh ơi sao EDTA khó tan trong đệm McIlvaine quá. tụi em rất khó khăn khi hòa tan nó trong McIlvaine. anh có cách nào làm cho nó tan dễ dàng k? (EDTA tụi em dùng ở dạng muối Natri của nó mà sao vẫn khó tan) hơn nữa khi pha xong để một thời gian ngắn thì thấy có hạt lơ lửng. tại sao vậy?

[petiti]

Nguyên văn bởi nguyenmaiF

đúng rồi đó anh, mà anh ơi sao EDTA khó tan trong đệm McIlvaine quá. tụi em rất khó khăn khi hòa tan nó trong McIlvaine. anh có cách nào làm cho nó tan dễ dàng k? (EDTA tụi em dùng ở dạng muối Natri của nó mà sao vẫn khó tan) hơn nữa khi pha xong để một thời gian ngắn thì thấy có hạt lơ lửng. tại sao vậy?

Đúng là hơi khó tan thôi, nhưng chỉ cân rung siêu âm là tan thôi mà.
Dung dịch này dùng được môt tuần cơ mà, nếu pha xong trong thời gian ngắn mà có hạt lơ lửng thì có lẽ cần xem lại các muối xem có vấn đề gì không. Nếu không em thử lọc qua màng lọc trước khi sử dụng xem.
Về phần béo có lẽ xử lý thế này: Ly tâm lạnh để loại béo ở phía trên. Giả sử thể tích chiết 50ml thì em chỉ lấy 10-25ml đi qua cột thôi. Sau khi tính kết quả sẽ tính theo hệ số.

[nguyenmaiF]

Nguyên văn bởi petiti

Đúng là hơi khó tan thôi, nhưng chỉ cân rung siêu âm là tan thôi mà.
Dung dịch này dùng được môt tuần cơ mà, nếu pha xong trong thời gian ngắn mà có hạt lơ lửng thì có lẽ cần xem lại các muối xem có vấn đề gì không. Nếu không em thử lọc qua màng lọc trước khi sử dụng xem.
Về phần béo có lẽ xử lý thế này: Ly tâm lạnh để loại béo ở phía trên. Giả sử thể tích chiết 50ml thì em chỉ lấy 10-25ml đi qua cột thôi. Sau khi tính kết quả sẽ tính theo hệ số.

Rất cảm ơn anh đã quan tâm, lúc trước tụi em hòa tan EDTA bằng cách khuấy điện từ nhưng do thể tích khuấy chỉ được 250ml nên mỗi lần pha đệm tốn rất nhiều thời gian.
Về phần tách béo: tụi em cũng li tâm ở nhiệt độ lạnh (có khi tới 0 độ C) thấy phía bề mặt dung dịch có lớp màng mỏng, sau khi lọc qua giấy lọc, phần màng này bị giữ lại trên giấy lọc. Có lẽ phần thể tích qua cột giảm lại là có thể, nhưng nếu lượng chất trích ly không đủ để tạo nên pic phân biệt rõ ràng được thì anh nghĩ lúc đó phải làm sao? em thấy sau khi mẫu lên máy chạy cho tạp trong khoảng thời gian 0-4 phút rất nhiều, có những tạp gần như sát bên pic của chất phân tích --> nhiễu tạp. ??? --> chưa khắc phục được.

[nguyenmaiF]

Nguyên văn bởi petiti

Đúng là hơi khó tan thôi, nhưng chỉ cân rung siêu âm là tan thôi mà.
Dung dịch này dùng được môt tuần cơ mà, nếu pha xong trong thời gian ngắn mà có hạt lơ lửng thì có lẽ cần xem lại các muối xem có vấn đề gì không. Nếu không em thử lọc qua màng lọc trước khi sử dụng xem.
Về phần béo có lẽ xử lý thế này: Ly tâm lạnh để loại béo ở phía trên. Giả sử thể tích chiết 50ml thì em chỉ lấy 10-25ml đi qua cột thôi. Sau khi tính kết quả sẽ tính theo hệ số.

Tụi em vừa hòa tan EDTA trong dung dịch đệm bằng cách rung siêu âm như anh đã nói -->tuyệt vời, tan nhanh chóng. cám ơn anh đã chỉ dẫn.

[petiti]

Nguyên văn bởi nguyenmaiF

Rất cảm ơn anh đã quan tâm, lúc trước tụi em hòa tan EDTA bằng cách khuấy điện từ nhưng do thể tích khuấy chỉ được 250ml nên mỗi lần pha đệm tốn rất nhiều thời gian.
Về phần tách béo: tụi em cũng li tâm ở nhiệt độ lạnh (có khi tới 0 độ C) thấy phía bề mặt dung dịch có lớp màng mỏng, sau khi lọc qua giấy lọc, phần màng này bị giữ lại trên giấy lọc. Có lẽ phần thể tích qua cột giảm lại là có thể, nhưng nếu lượng chất trích ly không đủ để tạo nên pic phân biệt rõ ràng được thì anh nghĩ lúc đó phải làm sao? em thấy sau khi mẫu lên máy chạy cho tạp trong khoảng thời gian 0-4 phút rất nhiều, có những tạp gần như sát bên pic của chất phân tích --> nhiễu tạp. ??? --> chưa khắc phục được.

Nguyên văn bởi nguyenmaiF

Tụi em vừa hòa tan EDTA trong dung dịch đệm bằng cách rung siêu âm như anh đã nói -->tuyệt vời, tan nhanh chóng. cám ơn anh đã chỉ dẫn.

Rất mừng vì đã giải quyết được vấn đề.

Còn vấn đề độ nhạy, mình cũng đã nói là cần cân nhắc để thực hiện mà.

Về thời gian từ 0-4 phút sẽ có nhiều tạp, do đó trong sắc ký cần bố trí để đảm bảo thời gian lưu của chất phân tích phải đủ lớn. Thông thường theo quy định thì thời gian lưu của chất phân tích nên lớn hơn ít nhất là 3 lần thời gian lưu chết.
Ví dụ thời gian chết T0 là 1 phút thì thời gian lưu của chất phân tích tối thiểu phải > 3 phút.
Trong phân tích TC, OTC và CTC theo anh nên thay đổi một tí điều kiện pha động để làm tăng thời gian lưu của 3 chất này lên. Thường thì tăng lên 3 chất OTC, TC, CTC lần lượt khoảng 5 phút, 6 phút và 12-13 phút là OK.