HPLC lỗi ở đâu?

[nguyenguyen]

tình hình la em có vấn đề về HPLC như này, mong anh/chị nào giúp đỡ.
máy HPLC của em sử dụng là HPLC waters 2690. detector waters 996 photodiode array.
khi chạy HPLC waters " RP-C18) phân tích mẫu bình thường, thì thời gian lưu của chất là khoảng 33-35 "chương trình em chạy là 45 phút, acetonitrin và acid acetic 0,5% v/v". bình thường chạy thì ko sao. nhưng một hôm, em chạy cột CC "column chromatography". và dùng luôn HPLC để check phân đoạn của CC. dung môi chạy CC khi đó là benzen:etyl acetat "98:2". khi chạy HPLC từ dịch này thì không xuất hiện chất ở phút 33-35 "mặc dù em check TLC trước đó". khi chạy HPLC mẫu này thì xuất hiện pick ở phút khoảng 10 "em cho rằng đấy là pick của dung môi".
sau đó, em rửa cột bằng Metanol. và từ đó chở đi, khi chạy bất kì nào "cùng một chất chuẩn với mẫu em chạy ban đầu" đều ra rất sớm ở phút 4-5. và với chương trình chạy 45 phút như trên, hoặc chương trình mới là 20 phút. đều có hiện tượng chất ra sớm. khi em đổi cột khác, cũng có hiện tượng này.
hjx. em không hiểu là bị làm sao.
sếp em bảo nó bị lỗi phần injection??? sếp em chữa bằng cách chạy mẫu aceton nhiều lần "lượng inject lớn". sắc đồ của các mẫu này đều xuất hiện một pick có cường độ hấp thụ rất lớn "chương trình chạy chỉ dùng metanol", sếp em thì bảo đấy là chất bẩn??? còn e thì cho đấy là aceton??? cao thủ nào cho em biết, ai đúng ạ?
cảm ơn mọi người!