Định lượng Vitamin - Page 2

Le Van Trong · 10-18-2007

chao Tụan
bai cua ban da dang tu lau nhung hum nay moi doc duọc
Truoc het, minh rat hoan ngenh y tuong cua ban da dua len dien dan nay
Minh da lam phan tich duoc kha lau rui dac biet la hoa ly, phan tich cac mau trong thuc pham nen cung co doi chut kinh nghiem ve cac chi tieu dinh duong.
Minh se nghien cuu phuong phap cua ban va se co ket qua som nhat nhe.
À, cho minh hoi ban lay thong tin cua phuong phap tren tu dau, hay tu ban nghien cuu dua ra quy trinh do.
hen som gap lai tren dien dan!

dunga2k8 · 04-30-2009

Chỗ mình toàn định lượng đồng thời cả 4 chất là Vitamin PP, B6, B2, B1 bằng HPLC với điều kiện sắc ký cũng giống như bạn ngvtuan mô tả,tách rất tốt, áp dụng được với cả viên nén, viên nang.... Còn Vitamin A, D, E chỗ mình hay dùng cột Si, ít khi xài cột C18. Mình đang muốn tham khảo về Định lượng Vitamin B5 bằng HPLC, nhưng bạn ngvtuan viết thế mình không hiểu với viên nang mềm có áp dụng được ko hay còn phải thêm giai đoạn chiết tác xử lý mẫu nữa :)

Ocean · 05-01-2009

Mình đã thử định lượng Vit.E trong một số hỗn hợp thì thấy có thể dùng cột C18, pha động là MeOH:ACN (95:5), dung dịch mẫu thử cũng chỉ cần hòa tan hoặc lắc siêu âm chất với MeOH, vận tốc dòng là 1ml/min và bước sóng cũng ở khoảng 284-286nm. Thời gian lưu cho Vit.E ở trường hợp này khoảng 6.3 - 6.4 min.
Mình chưa thử với Vit.A, mình gặp khó khăn khi hòa tan viên nan mềm trong MeOH, còn một số chất ở dạng dầu tách lớp trong MeOH, không biết làm cách nào để tách Vit.A ra khỏi lớp dầu một cách hiệu quả.
Định lượng các water-soluble vitamins thì mình có file đính kèm

otkieng08 · 05-03-2009

Hi các bạn!
Chắc các bạn đã từng phân tích nhiều vitamin tan trong nước cũng như vitamin tan trong dầu với nhiều dạng bào chế khác nhau, riêng mình chưa có kinh nghiệm nhiều trong phần này, mình muốn hỏi các bạn tại sao trong thành phần pha động khi định lượng Vitamin PP, B6, B5, B2... của bạn ngvtuan lại có KCl và PEG, mình thực sự không hiểu tại sao lại có hai thành phần đó, không có nó thì có được hay không? Hoặc mình có thể không dùng KCl mà dùng NaCl không? Riêng PEG, có rất nhiều loại nhưng phương pháp phân tích đó lại không đề cập đến loại nào.
Trong một số bài báo mình đọc trên mạng người ta không có dùng hai thành phần này nhưng lại có thêm triethylamin hoặc amoniac, sao vậy nhỉ???
À cũng có một tài liệu khá cũ rồi, trên tờ "thông báo kiểm nghiệm", mình không nhớ năm nào, trong pha động lại có EDTA???
Mình đang rất nhức đầu về vấn đề này, mong các bạn giải thích dùm mình! Thanks!

nguoivohinh · 05-08-2009

tiện đây cho mình hỏi luôn, làm sao xác định được các vitamine trong tảo củ thể ở đây là tảo sirlulina

**giotnuoctrongbienca** · 05-14-2009

Trích:

Nguyên văn bởi ngvtuan

các bạn thử nghiên cứu phương pháp này thử và cho nhận xét thử nhé
(phương pháp này quá rường rà phức tạp, theo các bạn có cách nào đơn giản hơn và chính xác hơn giúp mình với)

1. Định lượng: Vitamin PP, Vitamin B6, Vitamin C.

Cột RP 18 (250mm x 4.6mm; 5µm).
Detector UV : 280 nm.
Tốc độ dòng : 1,2 ml/phút.
Pha động :
- Natri heptansulfonat 1,1g
- Kali clorid 2,0g.
- Acid acetic băng 10ml.
- PEG 2ml.
- Nước cất 838 ml.
- Methanol vừa đủ 1000ml.
.Thể tích tiêm: 20µl.
- Dung dịch thử: Cân chính xác lượng bột khoảng 2.5g cho vào bình định mức 50ml, thêm 30ml dung dịch acid acetic 1% , lắc để hoà tan, thêm acid acetic 1% vừa đủ, lắc đều, lọc. Đo HPLC.
- Dung dịch chuẩn: chuẩn bị riêng từng dung dịch chuẩn các Vitamin C, Vitamin PP, Vitamin B6 trong dung dịch Acid acetic 1% để có nồng độ các vitamin tương đương với dung dịch thử, lọc. Đo HPLC.
- Kết quả: Từ diện tích hoặc chiều cao pic và nồng độ của các vitamin trong dung dịch chuẩn và dung dịch thử , tính được hàm lượng các vitamin PP, B6, và vitamin C.

2. Định lượng Vitamin B5: phương pháp HPLC.

- Điều kiện sắc khí:
Cột RP 18 (250mm x 4.6mm; 10µm).
Detector UV : 210 nm.
Tốc độ dòng : 1 -1,5 ml/phút.
Pha động : nước - acid phosphoric 85% ( 1000:1.)
Thể tích tiêm : 20µl.
- Dung dịch thử: Cân chính xác lượng bột chứa khoảng 6,0 mg calci pantothenat cho vào bình định mức 50 ml, thêm 30 ml dung dịch acid phosphoric 0,1 %, lắc siêu âm 20 phút, thêm dung dịch acid phosphoric 0,1 % vừa đủ, lắc đều, lọc, đo HPLC.
- Dung dịch chuẩn: Hoà tan Calci pantothenat chuẩn trong dung dịch acid phosphoric 0,1% để thu được dung dịch có nồng độ tương đương với dung dịch thử. Lọc, đo HPLC.
- Kết quả: Từ diện tích hoặc chiều cao pic và nồng độ Calci Pantothenat trong dung dịch chuẩn và dung dịch thử, tính được hàm lượng calci pantothenat.

3. Định lượng Vitamin E và Vitamin A: phương pháp HPLC:

a-Hoá chất thuốc thử:
- Methanol tinh khiết sắc ký.
- Nước tinh khiết sắc ký.
- Ethanol tuyệt đối (TT).
b-Điều kiện sắc ký:
Cột RP 18 (250mm x 4.6mm; 10µm).
Detector UV : Vitamin A - 330nm; Vitamin E - 284 nm.
Tốc độ dòng : 1 - 2 ml/phút.
Pha động : Methanol - nước - ethyl acetate (93: 3: 7).
Thể tích tiêm : 20µl.
- Dung dịch thử: Cân chính xác khoảng 2.5g vào bình định mức 100ml, thêm 50ml ethanol tuyệt đối, lắc kỹ. Thêm vừa đủ ethanol tuyệt đối tới vạch , lắc đều, lọc.
- Dung dịch chuẩn: Pha riêng rẽ từng dung dịch chuẩn vitamin E và vitamin A trong ethanol tuyệt đối để thu được dung dịch có nồng độ tương đương với dung dịch thử, lọc.
- Lần lượt tiêm dung dịch thử và dung dịch chuẩn của Vitamin A và Viatnmin E.
- Sắc ký đồ thu được theo thời gian lưu tăng dần các viatmin sẽ được tách ra theo thứ tự Vitamin A ra trước rồi đến Vitamin E ra sau.
- Kết quả: Từ diện tích hoặc chiều cao pic và nồng độ của Viatmin A và Vitamin E trong dung dịch chuẩn và dung dịch thử, tính được hàm lượng Viatmin A và vitamin E.

nvtuan nè
Tui rất khoái ý tưởng của bạn, và cũng rất muốn thực hành nghiên cứu theo hướng đáp ứng những yêu cầu của thực tế đặt ra. Ngăt nỗi một số hóa chất trong quy trình khá đắt tiền, ví dụ như heptansulfonate hay hexane sulfonate, khi xài phải pha 5mM, tức 1L mobile phase cần xấo xỉ 1 g, mà nghiên cứu thủ nghiệm thì chắc tốn nhiều hơn 1L pha động. Nếu bạn có một trong 2 chất trên và các chất chuẩn vitamine thì hỗ trợ cho tôi nhé
Thân ái

Ocean · 05-15-2009

Bạn không nói hàm lượng vitamin C trong sản phẩm là bao nhiêu nhỉ. Ở chỗ mình dùng pp chuẩn độ với dung dịch chuẩn là DPI cho sản phẩm chứa khoảng 0.5 % vitamin C, vừa nhanh vừa rẻ, lại không phải cầu kỳ trong khâu pha chế, kết quả vẫn cho độ đúng và độ lập lại rất tốt.
Với % vitamin C lớn hơn, có thể chuẩn với Iodine, phương pháp Iodine có sai số cao hơn, do dung dịch chuẩn Iodine được chuẩn hóa nồng độ từ dung dịch chuẩn Sodium Thiosulphate.

tuannaphaco · 07-31-2009

Cho tôi hỏi chút bạn nvtuan
- Phương pháp phân tích A và E: Bạn đã làm thực nghiệm pp phân tích A và E như trên chưa? tôi nghe nói pp đó không làm được vitamin A dạng palmitat sao ấy. Tôi chưa làm thử nhưng 1 đồng nghiệp của tôi đã thử, anh ấy bảo chỉ làm được với dạng vitamin A acetat thôi, còn dạng palmitat thì không thấy pic đâu.
- Phương pháp phân tích nhóm vitamin tan trong nước thì tôi thấy đã được sử dụng từ lâu và có vẻ không tinh giản đươc nữa thì phải bạn ạ. Trước tôi cũng có xem qua tài liệu phân tích nhóm này (một ít thôi) nhưng đại loại cũng thể cả.
Tôi cũng sử dụng phương pháp này, tôi thấy nếu sử dụng phương pháp này định lượng đồng thời vitamin C thì những mẫu có chứa hàm lượng B2 cao một chút sẽ không chính xác vì B2 khá là khó tan, xử lý để tan hết được B2 thì thời gian hơi lâu nên C bị mất khá nhiều. Bạn có cách nào xử lý làm hạn chế mất mát vitamin C thì chia sẻ tôi với.

Ocean · 08-02-2009

Trích:

Nguyên văn bởi tuannaphaco

Cho tôi hỏi chút bạn nvtuan
- Phương pháp phân tích A và E: Bạn đã làm thực nghiệm pp phân tích A và E như trên chưa? tôi nghe nói pp đó không làm được vitamin A dạng palmitat sao ấy. Tôi chưa làm thử nhưng 1 đồng nghiệp của tôi đã thử, anh ấy bảo chỉ làm được với dạng vitamin A acetat thôi, còn dạng palmitat thì không thấy pic đâu.

Cho tui nhiều chuyện môt chút. Vitamin A dạng nào cũng vậy, khi hòa tan mẫu dùng dung dịch NaOH, khoảng 10ml NaOH 5M cho ứng với dung dịch khoảng 1000ppm Vitamin A là ổn. Cách làm là cân khoảng 0.05 g vitamin A (hoặc lượng chất ứng với 0.05 g vit.A) cho vào bình mức, thêm NaOH, lắc khoảng 15-20 phút rồi định mức đến 100 ml với MeOH. Peak ra không những đẹp mà còn thỏa mọi yêu cầu về sắc ký. Ở đây mình đã thử với cột C18, pha động MeOH, vận tốc dòng 1 ml/min, bước sóng 235 nm. Dù là vit.A Acetate hay vit.A palmitate, dù là vit.A oily hay vit.A powder đều ra kết quả tốt cả.

Chú ý là với chất mà lượng vitamin A quá nhỏ (< 0.4 % vit.A) thì cách xử lý mẫu không giống như trên đâu nha. Tức là vẫn có thể dùng NaOH, nhưng cách chiết, tách, làm giàu mâu thì tùy mẫu và tùy hàm lượng vit.A có trong mẫu.

tuannaphaco · 08-06-2009

Trích:

Nguyên văn bởi Ocean

Cho tui nhiều chuyện môt chút. Vitamin A dạng nào cũng vậy, khi hòa tan mẫu dùng dung dịch NaOH, khoảng 10ml NaOH 5M cho ứng với dung dịch khoảng 1000ppm Vitamin A là ổn. Cách làm là cân khoảng 0.05 g vitamin A (hoặc lượng chất ứng với 0.05 g vit.A) cho vào bình mức, thêm NaOH, lắc khoảng 15-20 phút rồi định mức đến 100 ml với MeOH. Peak ra không những đẹp mà còn thỏa mọi yêu cầu về sắc ký. Ở đây mình đã thử với cột C18, pha động MeOH, vận tốc dòng 1 ml/min, bước sóng 235 nm. Dù là vit.A Acetate hay vit.A palmitate, dù là vit.A oily hay vit.A powder đều ra kết quả tốt cả.

Chú ý là với chất mà lượng vitamin A quá nhỏ (< 0.4 % vit.A) thì cách xử lý mẫu không giống như trên đâu nha. Tức là vẫn có thể dùng NaOH, nhưng cách chiết, tách, làm giàu mâu thì tùy mẫu và tùy hàm lượng vit.A có trong mẫu.

Đúng vậy, nếu làm theo cách đó tức là chuyển nó về dạng tự do thì như nhau hết. Nhưng bạn nvtuan lại xử lý mẫu bằng etanol tuyệt đối, như vậy nó đâu có chuyển về dạng tự do được và vẫn là ở dạng muối hòa tan thôi phải không?
Theo bạn nói tức là chỉ cần lắc 15-20 phút thì tôi nghĩ không chắc đã chuyển được hết nó về dạng tự do đâu. Chỗ tôi làm thì thường phải đun hồi lưu khoảng 30phút để xà phòng hóa.